การคัดเลือกแบคทีเรียส่งเสริมการเจริญของพืชและการผลิตรีคอมบิแนนท์เอนไซม์โปรตีเอสเพื่อการควบคุมไส้เดือนฝอยรากปม
Date
ISBN
Journal Title
Journal ISSN
Volume Title
Resource Type
Publisher
Views
Views1
Usage analytics
Journal Title
การคัดเลือกแบคทีเรียส่งเสริมการเจริญของพืชและการผลิตรีคอมบิแนนท์เอนไซม์โปรตีเอสเพื่อการควบคุมไส้เดือนฝอยรากปม
Authors
Recommended by
Abstract
การคัดเลือกแบคทีเรีย PGPR (Plant Growth Promoting Rhizobacteria) ที่สามารถสร้างเอนไซม์โปรตีเอสทําลายตัวอ่อนระยะ J2 ของไส้เดือนฝอยรากปม Meloidogyne incognita โดย เก็บตัวอย่างดินบริเวณรอบรากมันสําปะหลังที่ไม่มีประวัติการเป็นโรครากปม ในเขตจังหวัดนครราชสีมา จํานวนทั้งสิ้น 60 ตัวอย่าง นํามาคัดแยกแบคทีเรียที่มีคุณสมบัติการส่งเสริมการเจริญของพืชได้แก่ phosphate solubilization assay, siderophore production และ protease activity พบแบคทีเรียที่มีคุณสมบัติการส่งเสริมการเจริญของพืชและมีความสามารถในการสร้างเอนไซม์โปรตีเอส ทั้งสิ้น 17 ไอโซเลท นํามาสกัด Genomic DNA และเพิ่มปริมาณ DNA ส่วน Conserved region ของ 16S rRNA ด้วยเทคนิค PCR โดยใช้ไพรเมอร์ที่จําเพาะ นําไปวิเคราะห์ ลําดับเบส เปรียบเทียบกับลําดับเบสอื่นๆในฐานข้อมูล GenBank ของ NCBI เลือกไอโซเลทที่สามารถสร้างเอนไซม์โปรตีเอสสูงสุด 2 ไอโซเลท ได้แก่ DK4 และ DK36 ซึ่งให้ขนาดเส้นผ่าศูนย์กลางของโซน ใสบน skimmed milk agar 6.5 และ 6.2 ซม. ตามลําดับ และมีลําดับเบสคล้ายกับลําดับเบสของ Bacillus subtilis strain V26 และ Bacillus subtilis strain DL5-1 นําแต่ละไอโซเลทมาสกัด Genomic DNA และเพิ่มปริมาณยีนโปรตีเอส ขนาด 1,577 bp นําไปโคลนเข้าเวคเตอร์ pET30b แล้วนําเข้าสู่เซลล์เจ้าบ้าน E. coli เพื่อชักนําให้เกิดการแสดงออก (expression) ผลการศึกษาพบว่า ไอโซเลท DK4 และ DK36 มีการแสดงออกของรีคอมบิแนนท์โปรตีนบน SDS - PAGE ขนาด 37 kDa เมื่อนําไปทดสอบกิจกรรมเอนไซม์โปรตีเอสในการไฮโดรไลส์เคซีน พบว่า มีกิจกรรมของเอนไซม์โปรตีเอสที่ 151.83 และ 155.41 Uml-1 ตามลําดับ เมื่อนํารีคอมบิแนนท์โปรตีเอสมาศึกษา ประสิทธิภาพของในการทําลายตัวอ่อนระยะ J2 พบร้อยละของการตายของตัวอ่อนระยะ J2 เท่ากับ 74 และ 75 ตามลําดับ